人SM22α在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)、純化及抗體制備

人SM22α在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)、純化及抗體制備

目的:用酵母表達(dá)重組人平滑肌22α(SM22α)蛋白,制備兔抗人SM22α多克隆抗體.方法:利用PCR從pGEM3z-SM22α質(zhì)粒擴(kuò)增得到人SM22α基因編碼區(qū),重組至pPIC9構(gòu)建酵母表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染巴斯德畢赤酵母,進(jìn)行分泌型表達(dá).表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)分步鹽析和CM-纖維素柱層析純化后,免疫家兔,制備兔抗人SM22α多克隆抗體.結(jié)果:所構(gòu)建的pPIC9-SM22α酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)染酵母感受態(tài)細(xì)胞后,外源性SM22α可整合至酵母染色體中,經(jīng)甲醇誘導(dǎo)84 h,可實(shí)現(xiàn)SM22α的高效表達(dá)與分泌.用70%硫酸銨處理上清液,收集沉淀進(jìn)行離子交換層析純化后,經(jīng)變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)可見(jiàn)一分子量為22 kD的單一區(qū)帶.用該純化產(chǎn)物免疫家兔制備的兔抗人SM22α抗血清可用于檢測(cè)人或大鼠血管壁中SM22α的表達(dá)水平.結(jié)論:重組人SM22α可在巴斯德畢赤酵母中進(jìn)行高效表達(dá)與分泌,純化蛋白可用于抗體制備,為研究SM22α功能提供了檢測(cè)工具.

作 者： 溫進(jìn)坤 聶磊 李靜宜 程云會(huì) 韓梅 WEN Jin-kun NIE Lei LI Jing-yi CHENG Yun-hui HAN Mei   作者單位： 河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所,河北省醫(yī)學(xué)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河北,石家莊,050017  刊 名： 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 平滑肌22α   巴斯德畢赤酵母   分泌表達(dá)   抗血清  

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