人源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子突變體的克隆、分離純化及活性研究

人源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子突變體的克隆、分離純化及活性研究

目的:為獲得大量人源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子突變體(hVEGF121′)的重組蛋白,本文研究了其發(fā)酵條件,分離純化方法,并初步考察了其生物活性.方法:應(yīng)用PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變方法,將hVEGF121中對(duì)其活性影響較小的1～8位和115～121位兩個(gè)肽段替換成破傷風(fēng)毒素(TT)的兩個(gè)強(qiáng)表位肽段618～627位和831～837位,構(gòu)建高效表達(dá)的pET28a/hVEGF121′重組質(zhì)粒,考察誘導(dǎo)條件對(duì)目的蛋白表達(dá)量的影響;所得包含體經(jīng)過(guò)DEAE-Cellulose離子交換柱純化;初步比較了VEGF121和突變體VEGF121′的免疫和抗腫瘤效果.結(jié)果:最佳表達(dá)條件為:乳糖誘導(dǎo)時(shí)間6 h,誘導(dǎo)濃度2 mmol/L;離子交換純化后可得到電泳純的突變體hVEGF121′;初步的動(dòng)物免疫發(fā)現(xiàn)突變體VEGF121′和VEGF121有相近的免疫滴度,但前者抗腫瘤效果更顯著.結(jié)論:經(jīng)發(fā)酵純化后得到重組人源血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子突變體(hVEGF121′)的純品,并初步展現(xiàn)良好的抗腫瘤效果.

作 者： 周紅霞 周梅仙 吳潔 胡卓逸 劉景晶 ZHOU Hong-xia ZHOU Mei-xian WU Jie Hu Zhuo-yi LIU Jing-jing   作者單位： 周紅霞,ZHOU Hong-xia(中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,南京,210009;南京曉莊學(xué)院生命科學(xué)系,南京,210017)

周梅仙,ZHOU Mei-xian(南京曉莊學(xué)院生命科學(xué)系,南京,210017)

吳潔,胡卓逸,劉景晶,WU Jie,Hu Zhuo-yi,LIU Jing-jing(中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,南京,210009) 

刊 名： 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 37(3)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子   突變體   純化   免疫原性   抗腫瘤  

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