hIL-10在大腸桿菌中的表達(dá)及其生物學(xué)活性鑒定

hIL-10在大腸桿菌中的表達(dá)及其生物學(xué)活性鑒定

構(gòu)建了含有人白細(xì)胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重組質(zhì)粒,在大腸桿菌中的高效表達(dá),并對其生物學(xué)活性進行了鑒定.用RT-PCR擴增hIL-10 cDNA,并插入原核表達(dá)載體PET-32b.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,在37℃用IPTG誘導(dǎo)hIL-10表達(dá).表達(dá)的重組蛋白經(jīng)復(fù)性純化后,用夾心ELISA法檢測其對外周血單核細(xì)胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重組質(zhì)粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析顯示,克隆的DNA序列和文獻(xiàn)報道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重組蛋白相對分子質(zhì)量為18 000.活性測定結(jié)果顯示,重組蛋白能顯著抑制PBMC合成IFN-γ.這表明構(gòu)建的PET-32b/hIL-10可以在大腸桿菌中高效表達(dá),經(jīng)復(fù)性和純化后,獲得了具有高純度和活性的hIL-10.

作 者： 王旻東 孫自勇 陳俊勇 吳盛 智強 劉建寧 Wang Mindong Sun Ziyong Chen Junyong Wu Sheng Zhi Qiang Liu Jianning   作者單位： 王旻東,Wang Mindong(南京市公安局刑警支隊,江蘇,南京,210012)

孫自勇,陳俊勇,吳盛,智強,劉建寧,Sun Ziyong,Chen Junyong,Wu Sheng,Zhi Qiang,Liu Jianning(南京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所,江蘇,南京,210093) 

刊 名： 南京師大學(xué)報（自然科學(xué)版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2006 29(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 人白細(xì)胞介素-10(hIL-10)   克隆   表達(dá)   大腸桿菌   生物學(xué)活性   夾心ELISA  

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