嗜熱酯酶APE1547催化活性的定向進化研究

嗜熱酯酶APE1547催化活性的定向進化研究

對來源于嗜熱古菌Aeropyrum pernix的酯酶(APE1547)催化活性進行定向進化研究.利用APE1547特殊的穩(wěn)定性,建立了準確的高通量高溫酯酶篩選方法.對第一代隨機突變庫篩選獲得了催化活性較野生型提高1.5倍的突變體M010,序列分析表明其氨基酸突變?yōu)镽526S.從第二代突變庫中篩選出的總活力提高5.8倍突變體M020,突變位點為R526S/E88G/A200T/I519L,其比活力與M010一致,但表達量比野生型提高約4倍.對M020酶學 性質(zhì)表征發(fā)現(xiàn),其最適pH為8.5,比野生型向堿性偏移0.5;活性中心殘基酸性基團的解離常數(shù)(pK1)由野生型的7.0提高至7.5.晶體結(jié)構(gòu)分析表明,突變位點R526距離活性中心較近,將其突變?yōu)镾er降低了活性中心的極性,抑制了催化殘基His的解離,使酸性基團的解離常數(shù)升高.

作 者： 王秋巖 楊廣宇 劉艷莉 王艷平 馮雁 WANG Qiu-yan YANG Guang-yu LIU Yan-li WANG Yan-ping FENG Yan   作者單位： 吉林大學,分子酶學工程教育部重點實驗室,長春,130023  刊 名： 微生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(2)  分類號： Q93  關(guān)鍵詞： 定向進化   嗜熱酶   酯酶活力   解離常數(shù)  

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