PCR-雙酶切鑒定STGC3抑癌基因重組子假陽性研究

PCR-雙酶切鑒定STGC3抑癌基因重組子假陽性研究

目的:探討PCR與雙酶切技術(shù)聯(lián)合使用鑒定陽性重組子的特異性和可靠性,評價長期保存的重組質(zhì)粒再次測序的必要性.方法:對隨機選取已經(jīng)過測序驗證的三組STGC3/pcDNA 3.1(+)、一組STGC3/pGEM Easy T Vector重組子首先經(jīng)過LB氨芐平皿培養(yǎng)挑單克隆篩選,然后單獨或聯(lián)合使用PCR和雙限制性內(nèi)切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切方法鑒定,將陽性樣品送交生物工程公司測序,比較并評價兩者結(jié)果的一致性.結(jié)果:三組STGC3/pcDNA 3.1(+)重組子經(jīng)PCR-雙酶切檢測陽性而不能通過測序,說明該檢測方法在運用中確實存在假陽性,同時證明重組載體在長期保存后有必要再次鑒定.結(jié)論:保存過程中的雜菌污染、實驗室操作中的質(zhì)粒交叉污染以及重組載體基因突變是基因工程操作中不可忽視的問題;PCR-雙酶切鑒定重組載體存在假陽性的問題,實驗設(shè)計中應(yīng)包含陽性與陰性(污染)對照,并有足夠的重復(fù)實驗.

作 者： 蔣俊豪 賀修勝 JIANG Jun-hao HE Xiu-sheng   作者單位： 南華大學腫瘤研究所,湖南,衡陽,421001  刊 名： 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展  ISTIC 英文刊名： PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE  年，卷(期)： 2007 7(6)  分類號： Q331  關(guān)鍵詞： PCR   雙酶切   STGC3 基因   假陽性  

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