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豬α-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶基因打靶載體的構(gòu)建
目的:構(gòu)建豬α-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶(GGTA1)基因的正負篩選打靶載體.方法:以原代豬胚胎成纖維細胞基因組DNA為模板,采用長程PCR方法擴增出GGTA1基因的2條片段;以長約2 kb包含部分第9外顯子的片段為同源短臂,在Xba Ⅰ和Cla Ⅰ位點插入pLoxP質(zhì)粒正篩選標記neo基因的3'端;以長約5.4 kb包括部分第8外顯子、全部第8內(nèi)含子及部分第9外顯子的片段為同源長臂,于Not Ⅰ位點插入該質(zhì)粒中neo基因的5'端;2.7 kb的負篩選標記tk基因位于載體中同源短臂的3'端外側(cè).結(jié)果與結(jié)論:酶切、PCR及測序結(jié)果表明,同源臂被正確連接至質(zhì)粒pLoxP,成功構(gòu)建了豬GGTA1基因正負篩選打靶載體pSL/GT.
作 者： 常宏宇 宮鋒 季守平 鮑國強 李素波 章?lián)P培 李芳 聶亞玲 CHANG Hong-Yu GONG Feng JI Shou-Ping BAO Guo-Qiang LI Su-Bo ZHANG Yang-Pei LI Fang NIE Ya-Ling 作者單位： 常宏宇,CHANG Hong-Yu(第二炮兵總醫(yī)院,兒科,北京,100088;軍事醫(yī)學科學院,野戰(zhàn)輸血研究所,北京,100850)宮鋒,季守平,鮑國強,李素波,章?lián)P培,GONG Feng,JI Shou-Ping,BAO Guo-Qiang,LI Su-Bo,ZHANG Yang-Pei(軍事醫(yī)學科學院,野戰(zhàn)輸血研究所,北京,100850)
李芳,聶亞玲,LI Fang,NIE Ya-Ling(第二炮兵總醫(yī)院,兒科,北京,100088)
刊 名： 生物技術(shù)通訊 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分類號： Q78 關(guān)鍵詞： α-Gal表位 豬α-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶 基因打靶 異種移植【豬α-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶基因打靶載體的構(gòu)建】相關(guān)文章：
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