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核受體相關因子1表達下調(diào)對多巴胺能細胞酪氨酸羥化酶和神經(jīng)突起生長的影響
將合成的核受體相關因子1(nuclear receptor-relatedfactor 1,Nurr1)特異性短發(fā)夾寡核苷酸(small-hairpin RNA,shRNA)序列插入真核表達載體pSilenCircle(pSC),構建Nurr1基因特異性shRNA真核表達載體,轉染體外培養(yǎng)多巴胺能神經(jīng)前體細胞系MN9D,分別采用實時熒光定量PCR和Western blot方法檢測其對MN9D細胞內(nèi)源Nurr1的干擾作用及其對酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表達的影響,并在倒置顯微鏡下觀察MN9D細胞神經(jīng)突起生長的情況,探討Nurr1 shRNA表達載體對多巴胺能細胞表型標記物TH和以神經(jīng)突起延長為特征的細胞成熟的影響.結果表明,脂質(zhì)體組細胞和轉染陰性對照質(zhì)粒的MN9D細胞內(nèi)Nurr1、TH的表達正常,而轉染Nurr1 shRNA真核表達載體(pSC-N1和pSC-N2)的MN9D細胞內(nèi)Nurr1和TH的mRNA水平明顯降低,Nurr1 mRNA的下降率分別為62.3%和45.6%,TH mRNA的下降率分別為76.3%和62.6%.同時Nurr1和TH蛋白的表達亦明顯下調(diào),Nurr1蛋白的下降率分別為57.4%和72.0%,TH蛋白的下降率分別為79.1%和70.1%.另外,轉染Nurr1 shRNA真核表達質(zhì)粒的MN9D細胞神經(jīng)突起延長有所減少,但是與正常細胞無明顯差異.結果提示:Nurr1 shRNA真核表達載體能顯著下調(diào)MN9D細胞內(nèi)源Nurr1和TH mRNA和蛋白的表達,同時可能對MN9D細胞的神經(jīng)突起延長有一定的抑制作用.Nurr1 shRNA表達載體的成功構建為多巴胺能神經(jīng)元發(fā)育以及帕金森病相關基因的功能研究奠定了基礎.
作 者： 吳云成 蔡友慶 趙永波 費儉 WU Yun-Cheng CAI You-Qing ZHAO Yong-Bo FEI Jian 作者單位： 吳云成,趙永波,WU Yun-Cheng,ZHAO Yong-Bo(上海市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科、臨床神經(jīng)生化研究室,上海,200080)蔡友慶,費儉,CAI You-Qing,FEI Jian(中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所,上海,200031)
刊 名： 生理學報 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA PHYSIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 58(4) 分類號： Q4 關鍵詞： 核受體相關因子1 酪氨酸羥化酶 RNA干擾 帕金森病 發(fā)育 神經(jīng)突起【核受體相關因子1表達下調(diào)對多巴胺能細胞酪氨酸羥化酶和神經(jīng)突起生長的影響】相關文章：
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