融合牛腸激酶輕鏈EKL包涵體蛋白的復(fù)性純化

融合牛腸激酶輕鏈EKL包涵體蛋白的復(fù)性純化

大腸桿菌高密度發(fā)酵表達(dá)腸激酶輕鏈融合蛋白DsbA-rEKL,主要以包涵體形式存在.包涵體經(jīng)4mol/L尿素和0.5% Triton X-100洗滌,以6mol/L鹽酸胍、100mmol/LDTT溶解,在胱氨酸存在下,以脈沖加樣方式復(fù)性.融合蛋白復(fù)性在6mmol/L胱氨酸存在下、脈沖加量0.03mg/mL和復(fù)性終蛋白濃度0.3mg/mL為最佳復(fù)性方案.復(fù)性的融合蛋白加2mmol/L CaCL2后快速自切.經(jīng)IDA-Sepharose及Q-Sepharose純化,rEKL純度可達(dá)95%以上,可高效酶切重組瑞特普酶融合蛋白Trx-rPA.實(shí)現(xiàn)了大規(guī)模生產(chǎn)rEKL,每升發(fā)酵液經(jīng)復(fù)性及純化后,可得rEKL60mg/L以上,使以融合蛋白表達(dá)rPA等藥用蛋白成為現(xiàn)實(shí).

作 者： 易進(jìn)華 張?jiān)�興 YI Jin-Hua ZHANG Yuan-Xing   作者單位： 易進(jìn)華,YI Jin-Hua(華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200237;上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司,上海,201203)

張?jiān)�興,ZHANG Yuan-Xing(華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海,200237) 

刊 名： 生物工程學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： 融合蛋白   腸激酶   復(fù)性   包涵體  

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