萘脅迫下水稻幼苗抑制差減雜交cDNA文庫構(gòu)建

萘脅迫下水稻幼苗抑制差減雜交cDNA文庫構(gòu)建

從200mg/Kg萘脅迫水稻幼苗根系中成功分離和純化了高純度的總RNA和mRNA,并以無萘處理為Driver,以200mg/Kg的幼苗為Tester,通過cDNA雙鏈的合成及兩次PCR擴(kuò)增,富集到兩組處理中差異表達(dá)的大小在200～800bp的cDNA序列,pGEMT的連接和藍(lán)白斑篩選表明雜交文庫滴度和重組率分別達(dá)到1.5×106 pfu/mL和96%,共收集陽性克隆8000個,形成了抑制消減雜交的質(zhì)粒cDNA文庫.隨機(jī)挑取酶切質(zhì)粒的電泳分析表明,載體中均有插入片段.高效抑制消減雜交文庫的建立為進(jìn)一步分析基因的差異表達(dá)及分離萘脅迫下抗性基因奠定了基礎(chǔ).

作 者： 趙胡 ZHAO Hu   作者單位： 阜陽師范學(xué)院生物系,安徽,阜陽,236041;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,北京,100081  刊 名： 生物學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF BIOLOGY  年，卷(期)： 2008 25(3)  分類號： Q291  關(guān)鍵詞： 萘   水稻   抑制差減抑制雜交   cDNA文庫  

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