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促凋亡分子Bad真核表達(dá)載體構(gòu)建及其在人基底細(xì)胞癌細(xì)胞中的表達(dá)
目的:克隆Bcl-2相關(guān)促凋亡基因Bad的全長編碼序列,構(gòu)建Bad基因的真核表達(dá)載體并在人基底細(xì)胞癌細(xì)胞系(A431)中表達(dá),為研究該基因在人基底細(xì)胞癌治療中的作用奠定基礎(chǔ).方法:根據(jù)已發(fā)表的Bad基因的核苷酸序列設(shè)計并合成引物,用Hela細(xì)胞抽提的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),擴(kuò)增產(chǎn)物用XhoI和EcoRI雙酶切后定向克隆到真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1-myc中,用限制性內(nèi)切酶酶切重組質(zhì)粒pcDNA3.1-myc-Bad并對其DNA測定序列.用脂質(zhì)體法將pcDNA3.1-myc-Bad導(dǎo)入人基底細(xì)胞癌細(xì)胞系A(chǔ)431中,G418選擇培養(yǎng), Western blot及SABC-FITC 分析鑒定其表達(dá).瞬時轉(zhuǎn)染A431細(xì)胞,通過細(xì)胞計數(shù)和集落形成實(shí)驗(yàn)觀察其對A431細(xì)胞生長的影響.結(jié)果:RT-PCR擴(kuò)增出長500 bp的特異性片段,經(jīng)克隆至pcDNA3.1-myc后酶切鑒定證實(shí),并測序表明序列與GenBank報道完全一致.pcDNA3.1-myc-Bad在A431細(xì)胞中有表達(dá)并可影響細(xì)胞生長,與對照組有明顯差異.結(jié)論:成功克隆了Bad的編碼序列,構(gòu)建了其真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1-myc-Bad,并在瞬時轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后觀察到細(xì)胞生長受抑制.
作 者： 胡彬 封興華 劉芳 Hu Bin Feng Xinghua Liu Fang 作者單位： 胡彬,封興華,Hu Bin,Feng Xinghua(西安第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院口腔頜面外科,710032)劉芳,Liu Fang(北京解放軍空軍總醫(yī)院檢驗(yàn)科)
刊 名： 實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF PRACTICAL STOMATOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(3) 分類號： Q786 R730.261 關(guān)鍵詞： 人Bad基因 克隆 真核表達(dá)載體 基底細(xì)胞癌【促凋亡分子Bad真核表達(dá)載體構(gòu)建及其在人基底細(xì)胞癌細(xì)胞中的表達(dá)】相關(guān)文章：
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