南極冰藻 Chlamydomonas sp.ICE-L的 cDNA文庫構(gòu)

南極冰藻 Chlamydomonas sp.ICE-L的 cDNA文庫構(gòu)建及品質(zhì)檢測

為構(gòu)建南極冰藻 Chlamydomonas sp.ICE-L的cDNA文庫,提取對數(shù)生長期南極冰藻ICE-L的總RNA,以此為模板,通過PowerScript逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA; 再以第一鏈cDNA 產(chǎn)物為模板,用LD-PCR合成第二鏈cDNA.該cDNA產(chǎn)物經(jīng)分級分離轉(zhuǎn)入大腸桿菌中,即獲得南極冰藻ICE-L的cDNA原始文庫,其滴度為1.6×10 6 cfu/mL.擴(kuò)增后的cDNA 文庫的滴度為1.0×10 10 cfu/mL.用PCR方法測得文庫的重組率大于97 % ,插入cDNA的長度為0.5～1.8 kb,0.9 kb以上插入片段占50 %以上.取適量擴(kuò)增文庫稀釋并鋪平板,挑取72個獨(dú)立菌落,對其中22個獨(dú)立菌落所插入的cDNA進(jìn)行測序,克隆到了一個具有5'和3'非編碼區(qū)的40S ribosomal protein S5全長基因序列,GenBank收錄號為AM167929.

作 者： 王能飛 沈繼紅 金治平 趙愛云 林學(xué)政 WANG Neng-fei SHEN Ji-hong JIN Zhi-ping ZHAO Ai-yun LIN Xue-zheng   作者單位： 王能飛,沈繼紅,林學(xué)政,WANG Neng-fei,SHEN Ji-hong,LIN Xue-zheng(國家海洋局,第一海洋研究所,山東,青島,266061;國家海洋局,海洋生物活性物質(zhì)重點(diǎn)實驗室,山東,青島,266061;青島市天然產(chǎn)物研究開發(fā)實驗室,山東,青島,266061)

金治平,JIN Zhi-ping(清華大學(xué),生物系,北京,100084)

趙愛云,ZHAO Ai-yun(青島大學(xué),天然色素研究所,山東,青島,266071) 

刊 名： 海洋科學(xué)進(jìn)展  ISTIC PKU 英文刊名： ADVANCES IN MARINE SCIENCE  年，卷(期)： 2006 24(4)  分類號： Q949.2  關(guān)鍵詞： PCR   南極冰藻   Ribosomal protein S5   cDNA 文庫  

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