基于PCR的siRNA表達框的制備

基于PCR的siRNA表達框的制備

目的改進目前基于PCR的方法制備siRNA表達框,轉(zhuǎn)染細胞后產(chǎn)生高效的RNA干擾作用.方法從K562細胞中提取基因組DNA,以此為模板,PCR擴增U6啟動子序列并克隆至pMD18-T載體中,用載體上的引物進行擴增,所得產(chǎn)物即制成作為擴增siRNA表達框的模板.選擇p53為靶基因,擴增制備siRNA表達框,測序驗證后,轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細胞48h后提取RNA進行RT-PCR,檢測RNA干擾的效應(yīng).結(jié)果測序結(jié)果表明所克隆的U6啟動子序列正確.細胞轉(zhuǎn)染表達框,在mRNA水平上,p53基因的表達明顯受到了抑制.結(jié)論本實驗所制作的基于PCR的方法制備siRNA表達框可以很好地應(yīng)用于RNAi作用研究.

作 者： 郭秋野 馬文麗 張寶 吳清華 嚴律 鄭文嶺 GUO Qiu-ye MA Wen-li ZHANG Bao WU Qing-hua YAN Lü ZHENG Wen-ling   作者單位： 郭秋野,馬文麗,張寶,吳清華,嚴律,GUO Qiu-ye,MA Wen-li,ZHANG Bao,WU Qing-hua,YAN Lü(南方醫(yī)科大學(xué)基因工程研究所,廣東,廣州,510515)

鄭文嶺,ZHENG Wen-ling(華南基因中心,廣東,廣州,510830) 

刊 名： 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 26(4)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： RNAi   siRNA   U6啟動子   PCR表達框架   SH-SYSY細胞  

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