50L規(guī)模中試發(fā)酵重組核苷二磷酸激酶A工程菌

50L規(guī)模中試發(fā)酵重組核苷二磷酸激酶A工程菌

中試規(guī)模發(fā)酵重組人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化.搖瓶培養(yǎng)一級(jí)種子至合適密度,以10%比例接種二級(jí)種子培養(yǎng)基,在7L發(fā)酵罐中培養(yǎng)至OD600為9.6～10.5,然后轉(zhuǎn)入80L發(fā)酵罐中進(jìn)行補(bǔ)料分批培養(yǎng),所得菌體裂解后,經(jīng)離子交換層析和親和層析兩步純化得重組蛋白制品.結(jié)果表明,50L培養(yǎng)液經(jīng)過10h培養(yǎng)后,濕菌收量為1560g/批,NDPK-A表達(dá)量為23.8%.另外,補(bǔ)料方式對(duì)發(fā)酵密度有明顯影響.與單純補(bǔ)加碳源相比,同時(shí)補(bǔ)加碳源和氮源可以顯著提高菌體產(chǎn)量,但對(duì)目的蛋白表達(dá)量的提高不明顯.在較優(yōu)條件下,菌體產(chǎn)量為(2220.00±169.71)g/批,蛋白表達(dá)量為(22.00±0.42)%,純化后重組蛋白得率為510mg/L.產(chǎn)物可溶、密度適中、工藝簡便的中試發(fā)酵條件的建立為高得率、大規(guī)模制備重組rhNDPK-A奠定了基礎(chǔ).

作 者： 熊盛 錢垂文 黃立 劉秋英 張美英 王一飛 XIONG Sheng QIAN Chui-wen HUANG Li LIU Qiu-ying ZHANG Mei-ying WANG Yi-fei   作者單位： 熊盛,錢垂文,XIONG Sheng,QIAN Chui-wen(暨南大學(xué)藥學(xué)院,廣州,510630;暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地,廣州,510630)

黃立,劉秋英,張美英,王一飛,HUANG Li,LIU Qiu-ying,ZHANG Mei-ying,WANG Yi-fei(暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地,廣州,510630) 

刊 名： 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(10)  分類號(hào)： Q93  關(guān)鍵詞： 核苷二磷酸激酶   中試   發(fā)酵   純化  

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