人HIF-1α基因重組腺病毒的構建與鑒定

人HIF-1α基因重組腺病毒的構建與鑒定

目的 構建人缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)基因的重組腺病毒載體,并觀察其對HepG2細胞的轉染情況.方法 采用基因工程技術,經(jīng)過亞克隆將人HIF-1α基因片段克隆至穿梭質粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系統(tǒng)進行細菌內同源重組后,經(jīng)脂質體轉染HEK293細胞,進行重組腺病毒的包裝、擴增.采用PCR方法對重組腺病毒進行鑒定,利用穿梭質粒中帶有綠色熒光蛋白GFP報告基因,進行病毒滴度的測定和對HepG2細胞感染效率的監(jiān)測.結果 酶切鑒定及PCR結果證明重組腺病毒載體成功,人HIF-1α重組腺病毒滴度達1.15×1010 pfu/ml,陰性對照腺病毒的滴度為8×1010 pfu/ml,并對HepG2細胞具有很強的感染力.結論 應用細菌內同源重組法成功構建了含人HIF-1α基因的重組腺病毒載體.

作 者： 蔣春華 高鈺琪 黃慶愿 黃緘 賀偉峰 段小軍 JIANG Chun-hua GAO Yu-qi HUANG Qing-yuan HUANG Jian HE Wei-feng DUAN Xiao-jun   作者單位： 蔣春華,高鈺琪,黃慶愿,黃緘,JIANG Chun-hua,GAO Yu-qi,HUANG Qing-yuan,HUANG Jian(第三軍醫(yī)大學,高原軍事醫(yī)學系病理生理學與高原生理學教研室,全軍高原醫(yī)學重點實驗室,重慶,400038)

賀偉峰,HE Wei-feng(第三軍醫(yī)大學,西南醫(yī)院全軍燒傷研究所,創(chuàng)傷、燒傷與復合傷國家重點實驗室,重慶,400038)

段小軍,DUAN Xiao-jun(第三軍醫(yī)大學,西南醫(yī)院骨關節(jié)中心,全軍矯形外科中心,重慶,400038) 

刊 名： 第三軍醫(yī)大學學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE  年，卷(期)： 2006 28(20)  分類號： Q782 Q789  關鍵詞： 腺病毒   HIF-1α基因   同源重組  

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